【摘要】目的探讨Caveolin-1与P53在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用组织芯片技术结合免疫组化检测63例食管鳞癌组织，20例食管鳞状上皮非典型增生及15例正常食管鳞状上皮中Caveolin-1与P53蛋白的表达。结果食管癌中Caveolin-1与P53的表达高于正常食管黏膜、非典型增生食管黏膜（P<0.05）；Caveolin-1的表达与淋巴结转移、病理学分级及临床分期有关，而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、浸润深度无关(P>0.05)；P53的表达与淋巴结转移、浸润深度有关，而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、病理分级及临床分期无关(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示Caveolin-1与P53表达呈正相关(r=0.519，P=0.000)。结论Caveolin-1与P53过表达可能是食道癌发生、发展以及浸润转移的重要原因之一，Caveolin-1可能上调P53的活性，联合检测可判断食管癌的预后。
【关键词】食管癌；组织芯片；Caveolin-1；P53；免疫组织化学
Expressions of Caveolin-1 and P53 in esophageal carcinoma and its clinical significance DU Ri-chang,CHEN Yu-ying,TAN Li-shan,CHEN Zhi-hui,LI Hai-nan,GUO Hui,ZHANG Zhen-bin.Shaoguan First Peoples Hospital,Shaoguan 512000,China
【Abstract】ObjectiveTo study the expression of Caveolin-1 and P53 proteins in esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance.MethodsWe tested Caveolin-1 and P53 proteins by immunohistochemistry and tissue microarray in 63 cases of esophageal squamous cell carcinoma, 20 cases of atypical hyperplasia and 15 cases of normal esophageal squamous cell.ResultsThe expressions of Caveolin-1 and P53 was significantly higher in esophageal carcinoma than in normal esophageal mucosa,and esophageal dysplasia (P<0.05);Caveolin-1 expression and lymph node metastasis, pathological grade and clinical stage, but not with age, gender, tumor size, invasive depth independent (P>0.05).P53 expression and lymph node metastasis, depth of invasion,but not with patient age, gender,tumor size,pathological grade and clinical stage (P>0.05).Spearman rank correlation analysis showed that the expression of Caveolin-1 was positively correlated with P53(r=0.519,P=0.000).ConclusionCaveolin-1 and P53 overexpression may be the occurrence of esophageal cancer, development and metastasis is one of the important reasons, and the Caveolin-1 may increase the activity of P53.The joint test can determine the prognosis of esophageal cancer.
【Key words】 Esophageal carcinoma；Tissue microarray；Caveolin-1；P53；Immunohistochemistry
食管癌是一种常见的恶性肿瘤，侵袭和转移是食管癌死亡的主要原因。Caveolin-1不仅与胆固醇运输、信号传导、细胞内吞、血管生成等过程相关，而且也与肿瘤发生过程中细胞的恶性转化、增殖、侵袭、转移以及信号传导的调控有密切关系［1］。p53基因突变导致对细胞周期的调节功能丧失，使细胞异常增殖和恶性转化［2］。本文应用组织芯片及免疫组织化学的方法检测食管鳞状细胞癌中Caveolin-1及P53的表达及其与各临床病理学参数之间的关系,旨在探讨Caveolin-1及P53在食管癌发生、发展及转移过程中的意义。
1资料与方法
1.1一般资料收集广东医学院附属韶关医院，韶关市第一人民医院病理科2007年1月~2010年8月间病理科存档石蜡包埋标本63例食管癌标本，所有标本术前均未行放疗、化疗或免疫治疗。其中男38例，女25例；年龄31~85岁，中位年龄57岁。食管癌组织包括高分化鳞癌21例，中分化鳞癌24例，低分化鳞癌18例。其中淋巴结转移阳性组39例，淋巴结转移阴性组24例。同时取距离癌灶边缘5 cm以上的食管黏膜15例，20例内镜活检食管鳞状上皮非典型增生作对照。
1.2组织微阵列的制作对每一组织标本,均先观察HE切片以确定蜡块肿瘤部位,每一标本各取1点,参照漆楚波等［3］制作方法稍作改进，手工制成组织芯片。具体制作过程如下：利用空白蜡块模具制备蜡块毛坯，用模具管刀(5×7)钻出阵列孔(组织直径为1.5 mm)用单管刀挖取目标组织依次将目标组织装入阵列孔蜡对已装好目标组织的蜡块进行二次包埋。按常规理切片技术将石蜡切片制备成组织芯片。
1.3方法标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，作HE染色及免疫组织化学染色（EnVision法）。Caveolin-1蛋白多克隆抗体为Santa Cruz生物科技公司产品（克隆号：稀释度1∶200），P53单克隆抗体及免疫组化试剂盒为福州迈新生物技术公司产品。严格按说明书进行，用已知阳性组织切片作阳性对照，同时PBS替代第一抗体作阴性对照。
1.4结果判定标准Caveolin-1阳性表达均位于细胞质内。P53阳性定位于胞核。以综合染色强度和阳性细胞所占的百分比作为评价标准：在400倍视野下计数500个细胞，其中染色深度以多数细胞的呈色反应为准：以无染色为0分，淡黄色为1分，黄或深黄色为2分，褐色或棕褐色为3分。再将阳性细胞数所占比例打分，阴性0分，阳性细胞≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度和阳性百分比的乘积＞3分为阳性。
1.5统计学处理应用SPSS 13.0软件系统，组间比较采用χ2检验与连续性校正χ2检验，相关分析采用Spearman等级相关分析法。以P<0.05为差异有统计学意义，以P<0.001为差异有显著的统计学意义。
2结果
2.1Caveolin-l与P53在不同病变食管组织中的表达Caveolin-1与P53在正常食道黏膜、非典型增生食管黏膜及食管癌细胞中有阳性表达，χ2检验显示在正常食管膜、非典型增生食管黏膜及食管癌组间阳性表达率的差异有显著的统计学意义（P<0.001），见图1~4，表1。
2.2食管癌中Caveolin-1与P53蛋白的表达与临床病理参数的关系经χ2检验，Caveolin-1的表达与淋巴结转移、病理学分级及临床分期有关(P<0.05)，而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、浸润深度无关(P>0.05)；P53的表达与淋巴结转移、浸润深度有关(P<0.05)，而与患者的年龄、性别，肿瘤的大小、病理分级及临床分期无关(P>0.05)，见表2。
2.3食管癌中Caveolin-l与P53表达的相关性Spearman等级相关分析显示Caveolin-l与P53蛋白表达呈正相关(r=0.519，P<0.05)，见表3
3讨论
窖蛋白（Caveolin-1）是近年新认识的胞膜窖（Caveolae）的标记性蛋白,修饰于Caveolin的内表面，是相对分子质量为21～24 KD的膜整合蛋白。Caveolin-1不仅与胆固醇运输、信号传导、细胞内吞、血管生成等过程相关，而且也与肿瘤发生过程中细胞的恶性转化、增殖、侵袭、转移以及信号传导的调控有密切关系。Caveolin-1存在于成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞等多种终未分化细胞中［4］。目前对于Caveolin-1在肿瘤的发生过程中机制尚未清楚。大多数实验支持Caveolin-1为候选的抑癌基因，文献报道Caveolin-1在结肠癌［5］、肺癌［6］等肿瘤组织中低表达，而在膀胱癌［7］、前列腺癌［8］组织却高表达。因此，Caveolin-1在肿瘤形成，发展中所扮演的角色根据肿瘤的起源不同显得异常复杂［9~12］。
瘤抑制基因P53蛋白失活是肿瘤发生发展中最重要的分子事件之一。P53蛋白有野生型及突变型两种亚型。由于野生型的P53蛋白半衰期短，具不稳定性，不易检测，突变型P53蛋白，其具有癌基因活性，可引起细胞恶性增殖且具有抗凋亡作用，导致细胞转化和肿瘤的发生。Wijnhoven等［13］报道食管病变从低度异型增生发展至高度异型增生的过程中，P53蛋白的表达率从＜10%上升至＞70%。占向鸿等［14］实验显示：P53阳性表达与肿瘤分化及淋巴结转移相关，与分期及预后无关。本组资料显示，63例食管癌组织中45例呈阳性表达，阳性表达率为71.42%(45／63)，明显高于正常食管组织及不典型增生食管黏膜(P<0.05)，提示P53蛋白基因突变与食管癌发生有关。可能是p53基因的突变导致食管癌的发生。本实验还显示P53的表达与淋巴结转移、浸润深度呈正相关，提示p53基因促进了食管癌的侵袭及转移。可作为判断食管癌预后的指标之一。但也有不同的报道，Sarbia等［15］认为食管癌p53基因表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级等无关。产生分歧的原因可能与选择病例的病期、来源不同及使用的P53抗体、实验方法等有关。
肿瘤的浸润和转移机制十分复杂，研究表明Caveolin-l及P53参与了其中的过程，但二者在肿瘤浸润和转移中相互关系尚不清楚。Ravid等发现，Caveolin-1通过上调胰岛素样生长因子受体-1（IGF-1）抑制失巢凋亡的发生及促进P53蛋白活性，使细胞更利于存活和生长。Galbiati等报道,Caveolin-1通过P53/P2lcipl/WAFl通路妨碍细胞周期的进展,上调Caveolin-1能阻遏细胞于G0/G1期,而下调Caveolin-1却促进细胞进入S期。本研究显示：Caveolin-l与P53二者在食管癌中表达呈正相关,提示二者在食管癌的发生、发展及转移过程中关系密切，并有相互协同作用，从某种意义上说，Caveolin-l可能起着与突变型P53具有促进肿瘤的发生的作用，由此笔者推断Caveolin-l可能上调P53的活性，共同促过食管癌的浸润与转移。因此，联合检测二者在食管癌中的表达情况对预测食管癌的生物学行为，指导临床治疗有一定意义,两者可能成为基因治疗食管癌的新靶点。
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【收稿日期】2011-03-24
(本文编辑:陈春梅)